光度定義

分光光度法是在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。常用的波長(cháng)范圍為：(1)200～400nm的紫外光區(2)400～760nm的可見(jiàn)光區,(3)2.5～25μm（按波數計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見(jiàn)光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定，定期進(jìn)行校正檢定。

儀器組成

分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白

定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。

光譜范圍

包括波長(cháng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200～400 nm的紫外光區.不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(cháng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍靛,紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計的光源.

氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長(cháng)的光譜可作為紫外光光度計的光源.

物質(zhì)的吸收光譜(1)

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現了幾條暗線(xiàn),即光源發(fā)射光譜中某些波長(cháng)的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱(chēng)為該溶液的吸收光譜.

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).

物質(zhì)的吸收光譜(2)

當光線(xiàn)通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過(guò)的光的強度減弱.因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過(guò)溶液.

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過(guò)光

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:

入射光 = 吸收光 十 透過(guò)光